В отношении определения физиологической активности и сравнительной оценки качества оригинальных и воспроизведенных лекарственных средств вне организма в настоящее время практически отсутствует какие-либо разработки. Общепринятый подход к сравнительной оценке таких средств основан на сопоставлении их биоэквивалентности (биодоступности).

Исследования биоэквивалентности предполагают, что фармакокинетически эквивалентные (биоэквивалентные) оригиналу воспроизведенные лекарственные средства (дженерики) обеспечивают одинаковую эффективность и безопасность фармакотерапии, то есть они являются терапевтически эквивалентными. Исследования лекарственных средств производятся на добровольцах. Их сопоставление по биодоступности основано на сравнении фармакокинетических параметров, оцененных для сравниваемых лекарственных средств при использовании различных физико-химических методов. Однако существующий подход требует больших затрат средств и времени и не позволяет учесть ряд жизненно важных побочных эффектов, связанных с изменением структуры мембран клеток крови, что приводит в ряде случаев к тяжелым последствиям для пациентов. Актуальной является задача разработки более достоверного способа анализа, позволяющего сопоставить лекарственные средства – оригинальные и дженерики, или фармацевтические субстанции, как в качественном отношении, так и с позиции безопасности пациентов.

В настоящее время актуальной проблемой является надежное сопоставление свойств оригинальных фармацевтических субстанций, а также ряда препаратов на их основе и их воспроизведенных копий – дженериков. Последние получают все большее распространение как более дешевые лекарственные средства не только в слаборазвитых или развивающихся странах, но и в высокоразвитых странах. Так, например, вопрос о переходе на дженерики рассматривается правительством Швеции. В США рынок дженериков только за один год с 2005 по 2006 гг. вырос более чем в 5,5 раз. Выпуск их является очень привлекательным для фирм, так как обеспечивает возможность быстрого получения высоких прибылей в виду исключения многих затрат, в частности связанных с клиническими испытаниями.

Проблема дженерик-препаратов сложна и противоречива. Она является актуальной для всех стран, в том числе и для российского лекарственного рынка. В настоящее время многие из специалистов отрасли и врачей, не говоря уже о потребителях лекарств, не представляют себе различий между оригинальными (инновационными препаратами) и воспроизведенными препаратами (дженериками), хотя федеральный закон Российской Федерации «О лекарственных средствах» ввел определение понятия «воспроизведенные лекарственные средства» еще в 1998 г. Оригинальные фармпрепараты проходят широкие клинические испытания. При регистрации дженериков сегодня в ограниченном числе случаев требуется установление биоэквивалентности по сравнению с оригинальным фармпрепаратом, которое не отражает лечебный и побочные эффекты [1].

Дженерик содержит то же самое активное вещество, что и оригинальный фармпрепарат, поэтому считается, что нет необходимости в дорогостоящих клинических исследованиях на терапевтическую эффективность, наличие побочных эффектов и возможных последствий его применения.

Однако сопоставление терапевтической эффективности оригинальных препаратов и соответствующих дженериков, которое проводится иногда на небольших выборках здоровых добровольцев, показало, что последние могут уступать оригиналу в терапевтической эффективности оригинального препарата и в случае дженерика нередко наблюдаются множественные побочные эффекты, отсутствующие в случае оригинала.

Наблюдаемое различие может быть, вероятно, объяснено различным составом примесей, присутствующих в обоих препаратах.

Хотя, согласно общепринятому мнению, оригинал и дженерик считают идентичными, если содержание активного компонента в них примерно одно и то же. В принципе это неверно, т. к. даже фармацевтические субстанции, полученные по разным технологиям, в которых содержание активного вещества примерно одно и то же, представляют собой различные вещества в связи с тем, что они содержат различное число примесей, отличающихся по качественному и количественному составу.

В настоящее время нет четкой системы, как за рубежом, так и в России, которая бы защищала рынок и потребителей от некачественных копий оригинальных фармацевтических препаратов.

Отсутствует какой-либо тест-метод для быстрого сравнения физиологической активности оригинальных фармпрепаратов и дженериков и соответствующих субстанций.

Выяснение вопроса с качеством и безопасностью дженериков является актуальным как для фармацевтических компаний, выпускающих оригинальные фармпрепараты и соответствующие дженерики, так и для врачей, пациентов и государственных контролирующих организаций в России и за рубежом. Актуальным является также выяснение этого же вопроса для фармацевтических субстанций, выпускаемых различными фирмами.

Нами предложен и разработан новый подход к решению проблемы сравнительной оценки физиологической активности фармацевтических субстанций и препаратов на их основе. Он отличается тем, что с помощью спектроскопии электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) и спиновых зондов изучают влияние этих средств или препаратов на структуру мембран эритроцитов, лимфоцитов и тромбоцитов, выделенных из одной и той же пробы крови человека, в зависимости от концентрации активного вещества в растворе и времени его контакта с клетками с последующим сопоставлением соответствующих данных, таких как величина изменения жесткости мембраны, продолжительность этого изменения во времени для мембран, полученных при концентрации, соответствующей максимальной терапевтической дозе [2].

Выбор нами в качестве тест-объектов 3-х форменных элементов крови – эритроцитов, тромбоцитов и лимфоцитов – основывается на том, что эти три вида клеток контролируют важнейшие процессы в организме: дыхание, свертывание крови и иммунитет. Отклонение жесткости мембраны от нормального состояния обусловливает изменение функции клеток и связанные с этим вероятные побочные эффекты.

Кроме того, мы проводим сопоставление фармпрепаратов и соответствующих субстанций по многомерному признаку (величина изменения жесткости мембраны, продолжительность этого изменения во времени для мембран изучаемых клеток). Отличия в фармпрепаратах, обусловленные наличием неизвестных примесей в соответствующей фармацевтической субстанции и наполнителе, используемых для изготовления таблетированных форм, сравниваемых фармпрепаратов, могут проявиться на разных клетках по-разному.

Разработанный нами новый подход может быть проиллюстрирован следующими конкретными примерами осуществления.

Были проведены эксперименты по выявлению различия в действии оригинального фармпрепарата и дженерика (активное вещество – индапамид) на структуру мембран клеток крови: эритроцитов, лимфоцитов и тромбоцитов. Изменение структуры мембран фиксировали с использованием метода ЭПР и ЭПР-зонда (16-доксилстеариновой кислоты – нитроксильного производного стеариновой кислоты). На основании полученных спектров рассчитывали показатель жесткости мембраны S по соответствующей формуле [3]. Этот показатель рассчитывали для контрольного образца соответствующих клеток крови, к которому не были добавлены исследуемые фармпрепараты, для образца таких же клеток крови, к которому эти препараты были добавлены, и рассчитывали изменение жесткости соответствующих клеточных мембран (ДS), связанное с добавкой фармпрепарата с учетом контрольного образца.

Полученные данные по изменению показателя жесткости соответствующих клеточных мембран в зависимости от концентрации активного вещества (индапамид) в растворе и времени воздействия приведены в Таблице 1 (концентрацию готовили исходя из максимально рекомендуемой суточной дозы препарата).

Как видно из Таблицы 1, при воздействии оригинального фармпрепарата и дженерика в одинаковых концентрациях (5*10-6 М) в течение 1 часа изменение жесткости мембран лимфоцитов и тромбоцитов практически одинаково, однако в случае эритроцитов оно различается примерно в 1,5 раза. При увеличении времени воздействия до 24-х часов структура мембран эритроцитов, обработанных оригинальным фармпрепаратом, полностью восстанавливается, в случае оригинального препарата изменение жесткости мембраны произошло в 1,5 раза, а в случае дженерика – в 2 раза. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что оригинальный фармпрепарат оказывает существенно меньше и обратимое взаимодействие на клеточную мембрану эритроцитов по сравнению с дженериком (воздействие которого необратимо).

Аналогичным образом было изучено влияние оригинальных фармпрепаратов (2-0 и 3-0, активные вещества – симвастатин и эналаприл – соответственно) и соответствующих дженериков (2-1, 2-2 и 3-1, 3-2) на структуру мембран клеток крови. Полученные данные приведены в таблицах 2 и 3 соответственно.

Концентрация активного вещества, для которой проводилось сопоставление, соответствовала максимальной рекомендуемой суточной дозе препарата.

Из приведенных данных видно, что воздействие дженерика 2-1 увеличивает жесткость мембран всех изучаемых клеток крови. Оригинальный препарат действует на мембраны лимфоцитов противоположным образом, разжижая их (ДS отрицательное) и заметно слабее воздействует на мембраны эритроцитов и тромбоцитов, по сравнению с дженериком 2-1, причем воздействие на мембраны эритроцитов обратимо. Дженерик 2-2 по своему воздействию на мембраны клеток крови в случае эритроцитов и тромбоцитов превосходит оригинальный препарат 2-0, а в случае лимфоцитов – близок к нему. Этот пример показал, что иногда дженерик может быть близок к оригиналу либо превосходит его.

В Таблице 3 приведены аналогичные данные для результатов исследования влияния оригинального препарата 3-0 (активное вещество – эналаприл) и двух его дженериков (3-1 и 3-2), на структуру мембран клеток крови.

Из приведенных в Таблице 3 данных видно, что оригинальный препарат оказывает меньшее, чем дженерики, воздействие на структурное состояние мембран эритроцитов, оно обратимо в течение 24 часов и не оказывает никакого воздействия на структурное состояние мембраны тромбоцитов и лимфоцитов.

В то же время дженерики 3-1 и 3-2 увеличивают жесткость мембран изучаемых клеток по сравнению с оригиналом 3-0, и их взаимодействие на мембраны эритроцитов необратимо после 24 часов инкубации. Эти дженерики отличаются между собой по степени воздействия на мембраны лимфоцитов и тромбоцитов.

Таким образом, приведенные примеры свидетельствуют о том, что предлагаемый способ позволяет осуществлять надежное сопоставление физиологической активности оригинальных фармпрепаратов и соответствующих дженериков, основанное на изучении их воздействия на структурное состояние мембран клеток крови – эритроцитов, тромбоцитов и лимфоцитов – с использованием метода ЭПР и ЭПР-зонда.

Специальное исследование, проведенное нами с индукторами тромбообразования (фактор активации тромбоцитов (ФАТ), адреналин, тромбин и др.) при изучении их воздействия на структурное состояние мембран тромбоцитов показали, что воздействие всех индукторов вызывает уменьшение жесткости мембран (ДS отрицательное) тромбоцитов. В связи с этим создаются условия, повышающие способность тромбоцитов к спонтанной агрегации и тромбообразованию. Увеличение жесткости мембран тромбоцитов приводит к уменьшению свертываемости крови и увеличивает вероятность кровотечений.

В случае лимфоцитов увеличение жесткости мембран приводит к снижению иммунитета.

Полученные нами данные не только подтверждают возможность достоверного сопоставления физиологической активности оригинальных препаратов и дженериков, но и показывают возможность выявления нежелательных побочных эффектов, опасных для пациентов, и которые не могут быть выявлены при обычных узконаправленных клинических исследованиях.